細胞凍存密度

用途與描述

1、無血清細胞凍存液用于免疫細胞及干細胞的存儲。
2、細胞保藏中心，無血清細胞凍存液用于細胞株的長期保存。
3、科研高校，無血清細胞凍存液用于細胞株凍存。
4、無血清細胞凍存液用于醫院樣本庫細胞樣本保存。

支持高密度凍存MSC細胞（1-2x10⁷ cells/mL），為常規血清凍存液的10倍。

無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分，一些保護劑，易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞，
同時另一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優先結合細胞外的水分子，降低細胞外溶液的電解
質濃度，減少陽離子進入細胞的數量。

我公司無血清細胞凍存液，為多種保護劑組合，在細胞內外進行雙重保護，大大提高了細胞復蘇存活率。

主要成分

無血清細胞凍存液的主要成分：氨基酸，維生素，無機鹽，白蛋白，冷凍保護劑。

使用方法

1、細胞凍存前準備

a)要求凍存的細胞在對數生長期，且活率大于90%。
b)計算細胞密度，一般要求密度在1-3x10⁶ cells/mL，不同細胞系請參照附表。 

2、細胞凍存過程

a）將要凍存的細胞懸液，進行細胞計數，計數后離心，800轉，3min即可。
b）棄去上清，將4度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中，根據密度調整細胞凍存液用量。
c）反復吹吸混勻后，分裝于細胞凍存管中，每管500ul-1000ul（建議500ul/管）。
d）將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可。

特別提醒：

1.凍存過程中，第2步和第3步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。
2.細胞凍存管一定要保證密封，否則在復蘇過程中有可能會炸裂。

3、細胞復蘇過程

a）提前開啟水浴鍋，溫度調節到37度。
b）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中，盡量1min內融化，時間越短對細胞影響越小。
c）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養基中充分混勻（如細胞冷凍保存液為500ul，則
加入到5ml新鮮培養基中，如細胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml新鮮培養基中。）
d）混勻后立即離心，800轉，3min即可，離心結束后棄上清，加入預溫的新鮮培養液。
e）混勻后分瓶置于二氧化碳培養箱中培養。（二氧化碳濃度根據培養基要求決定，通常為5%）

免疫細胞凍存時間與復蘇活率對照表

MSC細胞凍存時間與復蘇活率對照表

無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存細胞復蘇對比

一種無血清細胞凍存液號：ZL201710484789.6